Иммунологические исследования: подготовка и основные показатели

Иммунологические исследования: подготовка к анализу

Если вы хотите, чтобы результат был максимально точным, желательно соблюдать несколько правил. Во-первых, ничего не пейте (кроме воды) и не ешьте в течение 12 часов до сдачи анализа. Во-вторых, рекомендуется проводить исследования в утренние часы. Ни в коем случае не употребляйте алкогольные напитки перед сдачей за 12 часов. Курить нельзя за час до проведения иммунологического анализа. За 15 минут перед сдачей обязательно сядьте и успокойтесь (если вы волнуетесь). вы должны оставаться спокойными, чтобы в результате исследования были исключены эмоциональные и физические нагрузки.


На сегодняшний день существует сотни таких методов. Исходя из того, что информация результата ограничена, применяется один метод.

Что такое иммунологическое исследование и когда оно назначается?

Иммунологическое исследование — комплекс лабораторных анализов, которые позволяют понять, какие нарушения возникли в работе иммунной системы пациента. Оно позволяет оценить сотни показателей. Объектом для изучения обычно является венозная кровь.

Оценка состояния иммунной системы может потребоваться при диагностике и лечении широкого круга заболеваний. А значит — иммунологическое исследование крови могут назначить врачи общей практики, ревматологи, аллергологи, иммунологи, онкологи, гастроэнтерологи.

Причинами назначения анализа могут стать:

  • плохое самочувствие;
  • утомляемость;
  • частые простудные заболевания;
  • частые обострения хронических заболеваний и др.

Обычно при неясной клинической картине и неспецифических симптомах (к ним относятся и перечисленные выше) назначается комплексное исследование иммунитета, включающее оценку:

  • содержания в крови клеток иммунной системы с различными функциями;
  • активности иммунных клеток;
  • способности клеток поглощать бактерии и синтезировать антитела.

При подозрении на аллергические заболевания назначается комплекс иммунологических исследований на чувствительность к аллергенам. Набор оцениваемых показателей определится на основании подробного опроса пациента. Если больной замечает, что неприятные симптомы появляются, когда он гуляет за городом в июне, целесообразно провести исследование на чувствительность к пыльце растений. При отсутствии подозрений на причину аллергических реакций, скорее всего, будет назначено исследование на наличие антител к наборам аллергенов (аллергопанели):

  • пищевым аллергенам;
  • аллергенам, которые вдыхаются с воздухом (пыльца);
  • аллергенам, которые окружают человека в его доме (пыль, перо, шерсть животных) и т.д.

Заподозрив у пациента аутоиммунное заболевание, например волчанку, врач немедленно направляет его на иммунологическое исследование на антитела к ядрам собственных клеток в крови.

Обычно при неясной клинической картине и неспецифических симптомах (к ним относятся и перечисленные выше) назначается комплексное исследование иммунитета, включающее оценку:

Что такое антитела

Важную роль в защите человека от агрессии внешней среды выполняет иммунитет.

Когда в организм попадает антиген – чужеродный агент, в крови начинают вырабатываться антитела.

Антитела или иммуноглобулины – специфические белки, которые выделяются В-лимфоцитами. Их задача – устранение именно того «агрессора», который угрожает организму в данный момент. Это значит, что они действуют избирательно.

Антитела, прикрепляясь к антигенам, обездвиживают их, и при этом сигнализируют другим клеткам — участникам иммунного процесса, о необходимости запуска реакции, и о том куда именно ее направить.

На некоторые перенесенные инфекции существует иммунная память – в крови остаются антитела к определенному антигену.

Наличие или отсутствие определенного класса иммуноглобулинов может многое рассказать о состоянии организма человека.

Всего существует пять классов иммуноглобулинов: G, А, М, D. В зависимости от их количества и сочетания можно судить о состоянии здоровья человека и характере заболевания.

  • иммунодефицитные состояния как врожденные, так и приобретенные, в том числе СПИД;
  • аутоиммунные заболевания: ревматоидный артрит, системная красная волчанка;
  • заболевания органов ЖКТ;
  • половые инфекции;
  • злокачественные новообразования;
  • заболевания щитовидной железы нарушение её функции;
  • аллергии с выявлением аллергенов;
  • токсоплазмоз;
  • гепатит В и С;
  • герпес;
  • резус конфликт матери и плода;
  • кандидоз;
  • цитомегаловирусная инфекция;
  • гломерулонефрит;
  • миокардит;
  • остеомиелит.

Проведение иммунологических исследований: показания, нормы и отклонения

Иммунологические исследования позволяют оценить уровень защитных функций организма. Такие методы диагностики назначают пациентам, у которых подозревают аутоиммунное, инфекционное или паразитарное заболевание. Анализы иммунологического характера дают возможность выявить гормональные нарушения, точно определить группу и резус-фактор крови, распознать аллергические и аутоиммунные процессы, установить тканевые и опухолевые антигены.

Анализ крови на иммунитет проводят по назначению доктора. Показаниями к этому могут быть такие состояния:

Подготовка к исследованию

Исследование проводится натощак

Сложная подготовка к исследованию не требуется. Для проведения анализа крови с достоверными результатами необходимо придерживаться таких правил:

  • отказ от алкоголя за сутки до сдачи крови;
  • отказ от пищи за 12 часов до анализа;
  • исключение активного или пассивного курения за час до анализа;
  • информирование врача о принимаемых препаратах.

Женщинам не следует сдавать кровь в период менструации. Анализы в этот момент проводятся только по экстренным показаниям.

Женщинам не следует сдавать кровь в период менструации. Анализы в этот момент проводятся только по экстренным показаниям.

Показания к назначению иммунограммы

Наиболее часто врач определяет состояние иммунной защиты организма в следующих случаях:

  • различные длительно текущие хронические инфекционные заболевания, которые не чувствительны к терапии, или рецидивируют;
  • при диагностике иммунодефицита, врожденного или приобретенного, ВИЧ – инфекции;
  • когда существует хроническая аллергия;
  • Наследственная предрасположенность к онкологическим заболеваниям и при злокачественных новообразованиях;
  • при необходимости трансплантации органов;
  • в случае предстоящей сложной или длительной операции;
  • в случае развития осложнений после трансплантации органов и после оперативных вмешательств;
  • при лечении некоторыми препаратами — гормонами, цитостатиками, иммунодепрессантами и другими средствами, влияющими на иммунитет.

Конечно, существуют и другие показания, при которых проводятся иммунологические анализы крови, но эти показания могут быть определены, например, при совместной деятельности узких специалистов, например, врача ревматолога и клинического иммунолога.

Наконец, выявление концентрации отдельных типов иммуноглобулинов может не только рассказать о динамики развития инфекционного процесса, но и о том, как отличить острую стадию болезни от хронической, но и сделать выводы о наличии аллергического компонента, о разнице между аллергической реакцией организма и инфекционно воспалительным процессом.

Иммунологическое обследование первичное

Это исследование включает в себя комплексную оценку субпопуляционного состава лимфоцитов, уровня циркулирующих иммунных комплексов, основных классов иммуноглобулинов и С3-, С4-компонентов комплемента периферической крови. Такой набор тестов позволяет уточнить степень поражения иммунной системы, подобрать препарат для адекватной иммунокорригирующей терапии, оценить эффективность проводимого лечения, дать прогноз течения заболевания.

* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.

Набор тестов:

Иммунограмма, иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии.

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
  • Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования.
  • Полностью исключить прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием (по согласованию с врачом).
  • Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

В современном понимании иммунный статус человека – это совокупность лабораторных показателей, характеризующих ко­личественную и функциональную активность клеток иммунной системы в данный момент времени. Оценка иммунного статуса проводится с помощью иммунологического лабораторного обследования – иммунограммы. Иммунограмма крови не отража­ет избирательно состояние патологически измененного органа или системы, но позволяет оценить иммунную систему в целом (сум­марный эффект изменения активности иммунной системы в ответ на чужеродный антиген).

Определение клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови – основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлюориметрии.

Иммунофенотипирование – это характеристика клеток, полученная при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития.

CD-антигены (англ. cluster of differentiation antigens) – это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно меченные моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии рассчитать содержание лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлюориметрии лежит фотометрическое и флюоресцентное измерение отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов –

  • Т-лимфоциты (CD3 +CD19 – ),
  • Т-хелперы/индукторы (CD3 +CD4 + CD45 + ),
  • Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3 +CD8 + CD45 + ),
  • истинные натуральные “киллеры” (NK-клетки) (CD3 –CD56 +CD45 + ),
  • В-лимфоциты (CD19 +CD3 – ), –

но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

  • Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток (Т-NK-клетки) (CD3 + CD56 + CD45 + ),
  • NK-клетки, экспрессирующие альфа-цепь антигена CD8 (CD3 – СD8 + CD45 + ),
  • активированные В-лимфоциты (CD3 – CD25 + CD45 + ),
  • активированные Т-лимфоциты (CD3 + HLA-DR + CD45 + ) и активированные цитотоксические лимфоциты (CD8 + HLA-DR + CD45 + ),
  • В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3 – HLA-DR + CD45 + ),
  • активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие альфа-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3 + CD25 + CD45 + ),
  • регуляторные Т-хелперные клетки (CD4 + CD25 bright CD127 neg CD45 + ), выполняющие иммуносупрессорную функцию.

Такое всестороннее изучение клеточного состава лимфоцитов в совокупности с результатами других тестов, входящих в состав исследования, позволяет установить более тонкие механизмы иммунологических нарушений, уточнить степень и глубину поражения иммунной системы и подобрать препарат для последующей адек­ватной иммунокорректирующей терапии, оценить эффективность проводимого лечения, дать прогноз заболевания.

Когда назначается исследование?

Исследование рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по четырем основным иммунопатологическим синдромам.

С инфекционным синдромом:

  • частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов (гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, пневмонии с тенденцией к рецидивированию, бронхоплевропневмонии);
  • бактериальные инфекции кожи и подкожной клетчатки (пиодермии, фурункулез, абсцессы, флегмоны, септические гранулемы, рецидивирующий парапроктит у взрослых);
  • урогенитальные инфекции;
  • грибковые поражения кожи и слизистых оболочек, кандидоз, паразитарные инвазии;
  • рецидивирующий герпес различной локализации;
  • гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
  • длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
  • генерализованные инфекции (сепсис, гнойные менингиты).

С аллергическим (атопическим) синдромом:

  • атопический дерматит;
  • нейродермит;
  • экзема с инфекционным компонентом;
  • тяжелая атопическая бронхиальная астма, поллиноз, хронический астматический бронхит.

С аутоиммунным синдромом:

  • ревматоидный артрит;
  • рассеянный склероз;
  • диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
  • аутоиммунный тиреоидит;
  • неспецифический язвенный колит.

С иммунопролиферативным синдромом:

  • опухолевые процессы в иммунной системе (лимфомы, болезнь Ходжкина, острый и хронический лимфолейкоз, саркома Капоши).

Что означают результаты?

Уровень различных клеточных популяций лимфоцитов может повышаться или понижаться при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

Субпопуляция лимфоцитов

Повышение показателя

Снижение показателя

T-лимфоциты (CD3 + CD19 – )

– Острые и хронические инфекции

– Длительный прием лекарственных препаратов (особенно монотерапия)

– Прием биологически активных добавок

– Интенсивные занятия спортом

– Некоторые виды инфекций

– Прием иммуносупрессивных препаратов

T-хелперы (CD3 + CD4 + CD45 + )

– Ряд аутоиммунных заболеваний

– Отдельные T-клеточные инфекции

– Отравление солями бериллия

– Иммунодефицитные состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита)

– Алкогольная болезнь печени

– Прием иммуносупрессивных препаратов или прием стероидов

T-цитотоксические лимфоциты (CD3 + CD8 + CD45 + )

– Некоторые вирусные инфекции

– Ряд T-клеточных лимфозов

– Ряд аутоиммунных патологий

– Некоторые виды аутоиммунных, аллергических заболеваний

Активированные T-лимфоциты (CD3 + HLA-DR + CD45 + )

– Алкогольный цирроз печени

Не имеет диагностического значения

B-лимфоциты (CD19 + CD3 – )

– Ряд аутоиммунных патологий

– Длительное воздействие формальдегида

Натуральные “киллеры” (CD3 – CD56 + CD45 + ), (CD3 – CD16 + CD45 + )

– Фаза восстановления после вирусных инфекций (гепатит B, C)

– Ряд аутоиммунных заболеваний

Читайте также:  Влияние креатина на потенцию у мужчин: влияет ли и как?

– Алкогольный цирроз печени

– Ряд аутоиммунных заболеваний

– Иммуносупрессивная терапия и терапия стероидами

T-натуральные “киллеры”, НК-Т (CD3 + CD56 + CD45 + )

– Длительные хронические воспалительные процессы

– Тяжелое течение воспалительных процессов

– Длительная персистенция антигена в организме

Не имеет диагностического значения

B-1-клетки (CD19 + CD5 + CD27 – CD45 + )

– Аутоиммунная патология (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, миастения)

– Аутоиммунные поражения при инфекционных заболеваниях (хламидиоз, синдром Рейтера, бруцеллез)

Не имеет диагностического значения

T-reg. (регуляторные T-клетки (CD4 + CD25 bright CD127 neg CD45 + )

– Аутоиммунная патология (сахарный диабет 1-го типа, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, миастения)

К каждой иммунограмме прилагается письменное заключение врача-иммунолога.

Для диагностики патологий результаты этого исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов. Также следует отметить, что клиническую значимость исследования существенно повышает оценка иммунологического статуса пациента в динамике.

– Длительные хронические воспалительные процессы

Антиспермальные антитела (ИФА)

Антиспермальные антитела (ИФА) — дополнительный тест в диагностике иммунологических причин бесплодия у мужчин и женщин. Антиспермальные антитела обнаруживаются в крови, в слизи шейки матки, семенной плазме, на поверхности сперматозоидов. У мужчин лучше определять антиспермальные антитела в сперме. Сомнительные (близкие к пороговым) значения: 55-60 Ед./мл. В подобных случаях исследование целесообразно повторить через 2 недели.

Показания к назначению анализа:

  • необъяснимое бесплодие супружеской пары,
  • изменения спермограммы.

Повышение значений: вероятный фактор бесплодия.

Показания к назначению анализа:

Как проводится анализ

Необходимые среды организма (венозная кровь, слизь из носовой полости, глотки или гортани, спинномозговая жидкость) собираются в специальную стерильную емкость, согласно правилам сбора материалов для исследования. После этого, при необходимости, они проходят обработку с целью отделения клеточной составляющей биологических жидкостей от жидкой, выделением необходимых соединений. Подсчет необходимых показателей проводится с использованием специальной аппаратуры, иммунологических тестов, лабораторных реактивов.

  • Исключить сдачу иммунограммы во время протекания острой фазы патологии и менструаций;
  • Не употреблять алкоголь на протяжении 48 часов до сдачи анализа;
  • Курение в день проведения иммунограммы следует исключить до окончания всех необходимых процедур;
  • Лекарственные средства (особенно антибиотики, цитостатики, кортикостероиды, противовоспалительные, аспирин и ряд других), по возможности, следует прекратить принимать за 2 – 3 дня до исследования;
  • В день сдачи анализа следует избегать физических и психологических нагрузок;
  • Не употреблять жирную пищу, кофе вечером перед сдачей анализа и утром. Остальную пищу употреблять можно в обычных количествах.

Похожие главы из других книг:

При первичной инфекции вырабатываются антитела одного класса – т. н. иммуноглобулины М (IgM). Их нахождение в крови говорит о том, что организм болеет, и является показанием для назначения лечения.

Расшифровка основных показателей

Исследование базируется на специфическом взаимодействии антител и антигенов

При расшифровке анализа определяют показатели иммуноглобулинов различных групп. Эти антитела являются особенными молекулами, которые находятся на слизистых поверхностях и в крови, основная функция их состоит в обезвреживании токсических веществ и возбудителей инфекций.

Нормами этих иммуноглобулинов считаются следующие показатели в г/л:

  • Иммуноглобулин Е – от 30 до 240
  • Антитела класса А – от 0,9 до 4,5
  • Иммуноглобулин М – от 0,5 до 3,5
  • Ig класса G – от 7 до 17.
  • Нормальным считается результат, в расшифровке которого не обнаружены антинуклеарный фактор и аллоиммунные антитела. Также нормой является отсутствие HLA.
  • Показатель АТ-ТПО (антитела к тиреоидной пероксидазе) в норме при уровне меньше 5,6, а нормальный уровень АТ-ТГ (антитела к тиреоглобулину) составляет результат – не более 1,1.

Также учитывают следующие параметры иммунологического анализа и их нормы:

  • ИФА – не больше 60
  • Антистрептолизин – от 100 до 200 ЕД /мл
  • MAR-тест – до 50 процентов

Патологией является отклонения этих характеристик крови. При повышенном уровне определенных параметров специалист может заподозрить следующие заболевания:

  1. Повышение иммуноглобулина А – артрит, печеночная недостаточность, нефрит клубочковый, миеломная болезнь, гломерулонефрит, алкогольная интоксикация.
  2. Большое количество антител класса Е – паразитарные инвазии, аллергические явления (сенная лихорадка, крапивница, аллергический насморк, бронхиальная астма).
  3. Превышение от нормального показателя иммуноглобулина М – болезни печени, кандидоз, инфекционные болезни в острой форме, гепатиты, ревматоидный артрит, васкулит системный.
  4. Повышенный уровень класса G – ревматизм, ВИЧ, артрит, миелома, инфекционный мононуклеоз, красная системная волчанка.
  5. Превышение антинуклеарного фактора – гепатит, системная красная волчанка, артрит ревматоидный, системный васкулит, нефрит волчаночный.
  6. Антистрептолизин от 200 – стрептококковая инфекция (скарлатина, рожа, пиодермия, тонзиллит хронический, остеомиелит, ангина), ревматоидные поражения, гломерулонефрит в острой форме.
  7. ИФА – возможно бесплодие.
  8. MAR-тест – бесплодие у мужчин.
  9. Если в организме повышен уровень АТ-ТПО, то это может свидетельствовать о патологических состояниях щитовидки, болезнь Грейвса, аутоиммунный тиреоидит. Повышение АТ-ТГ указывает обычно на синдром Дауна, тиреоидит Хашимото, гипотиреоз, синдром Тернера, токсический зоб (диффузный), генетические заболевания.

Подробнее о том, как правильно подготовиться к анализам крови можно узнать из видео:

Также позволяют определить патологию и снижение уровня показателей:

  1. Иммуноглобулины класса А, М, G: лучевая болезнь, отравление, цирроз печени, отравление организма
  2. Класс Е: расширение сосудов, нарушение моторики

Физиологическое снижение иммуноглобулинов наблюдается у детей до полугодовалого возраста. Кроме того, иммуноглобулины понижаются в результате лечения цитостатиками и иммунодепрессантами.

Иногда пониженные показатели могут быть обусловлены стрессовыми ситуациями и физическим перенапряжением.

У женщин на расшифровку может влиять менструальный цикл. Расшифровкой исследования занимается специалист – иммунолог, который в бланке анализа делает заключение о состоянии иммунной защиты организма.


Иммунологический анализ является методом, который помогает устанавливать возможность человеческого организма противостоять различным вирусным и бактериальным заболеваниям. Это исследование определяет показатели иммунных сил за счет установления количества и качеств клеток, а также наличия антител в крови.

Иммунологическое исследование — определение адренокортикотропного гормона (АКТГ) и кортизола (кровь).

Накануне исследования Вам необходимо исключить физические нагрузки (в т.ч. спортивные тренировки) и прием алкоголя. В течение часа перед сдачей крови предпочтительно воздержаться от курения. Сдавать кровь на исследование необходимо

до 9-00 часов утра , если нет особых указаний Вашего лечащего врача.

до 9-00 часов утра , если нет особых указаний Вашего лечащего врача.

Иммунологические методы исследования в лабораторной практике

Преимущества иммунологического метода исследования.

Серологические реакции различаются по способности выявлять отдельные классы антител. Реакция агглютинации, например, хорошо выявляет lgM-антитела, но менее чувствительна для определения lgG-антител. Реакции связывания комплемента и гемолиза, которые требуют участия комплемента, не выявляют антитела, не присоединяющие комплемент, например lgA-антитела и lgE-антитела. В реакции нейтрализации вирусов участвуют лишь антитела, направленные против антигенных детерминант поверхности вириона, связанных с патогенностью. Чувствительность иммунулогических методов превосходит все другие методы исследования антигенов и антител, в частности радиоиммунный и иммуноферментный анализы позволяют улавливать присутствие белка в количествах, измеряемых в нанограммах и даже в пикограммах.

С помощью предложенного способа определяют группу и проверяют безопасность крови (гепатит В и ВИЧ-инфекция). При трансплантации тканей и органов, иммунологический метод позволяет определять совместимость тканей и тестировать методы подавления несовместимости. В судебной медицине используют реакцию Кастеллани для определения видовой специфичности белка и реакцию агглютинации для определения группы крови.

Иммунологические методы широко применяют в лабораторной диагностике инфекционных болезней. Этиологию заболевания устанавливают также на основании прироста антител к возбудителю в сыворотке крови реконвалесцента по сравнению с пробой, взятой в первые дни болезни. На основе исследования изучают иммунитет населения по отношению к массовым инфекциям, например к гриппу, а также оценивают эффективность профилактических прививок.

Развитию иммунологических методов способствовало создание моноклональных антител, продуцируемых гибридомой, полученной в результате слияния иммунокомпетентной клетки В-лимфоцита и клетки миеломы мышей. Моноклональные антитела несут только одну химически однородную популяцию антител, комплементарную специфической детерминанте антигена, что позволяет осуществлять тонкую дифференциацию белков. Развитие иммунологического метода исследования идет как по линии совершенствования реагентов (чистоты антигенов и антител), так и по линии создания автоматизированных систем постановки реакций и их инструментального учета.

Виды реакций метода иммунологического исследования.

В зависимости от их механизма и учета результатов, иммунологический метод исследования можно подразделить на 5 видов реакции.

1.Реакции, основанные на феномене агглютинации.

Агглютинация представляет собой склеивание клеток или отдельных частичек — носителей антигена с помощью иммунной сыворотки к этому антигену.

Реакция агглютинации бактерий с использованием соответствующей антибактериальной сыворотки относится к наиболее простым серологическим реакциям. Взвесь бактерий добавляют к различным разведениям испытуемой сыворотки крови и через определенное время контакта при t 37° регистрируют, при каком наивысшем разведении сыворотки крови происходит агглютинация. Реакцию агглютинации бактерий используют для диагностики многих инфекционных болезней: бруцеллеза, туляремии, брюшного тифа и паратифов, бациллярной дизентерии, сыпного тифа.

Реакции агглютинации для определения группы крови и резус-фактора основаны на взаимодействии аллоантител (изоантител) и антигенов эритроцитов. Антитела против резус-фактора являются неполными, они не способны к прямой реакции с резус-положительными эритроцитами, поэтому для их обнаружения используют реакцию Кумбса, основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток. К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, а вслед за этим антиглобулиновую сыворотку против lgG (непрямая реакция Кумбса). Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против lgG, и происходит агглютинация эритроцитов.

Реакция пассивной или непрямой гемагглютинации (РПГА, РНГА). В ней используют эритроциты или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса), на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела. Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами, называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов.

Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на феномене предотвращения (торможения) иммунной сыворотки гемагглютинации эритроцитов вирусами, используется для выявления и титрования противовирусных антител. Она служит основным методом серодиагностики гриппа, кори, краснухи, эпидемического паротита, клещевого энцефалита и других вирусных инфекций, возбудители которых обладают гемагглютинирующими свойствами, например, для серодиагностики клещевого энцефалита, в лунки панели разливают двукратные разведения сыворотки больного на щелочном боратном буферном растворе. Затем добавляют определенное количество, обычно 8 АЕ (агглютинирующих единиц), антигена клещевого энцефалита и после 18 ч экспозиции при t 4° вносят взвесь гусиных эритроцитов, приготовленную на кислом фосфатно-буферном растворе. Если в сыворотке крови больного есть антитела к вирусу клещевого энцефалита, то антиген нейтрализуется и агглютинация эритроцитов не происходит.

2.Реакции, основанные на феномене преципитации.

Преципитация происходит в результате взаимодействия антител с растворимыми антигенами. Простейшим примером реакции преципитации является образование в пробирке непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело. Широко применяют различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлетрофорез), которые носят одновременно качественный и количественный характер. В результате свободной диффузии, в геле антигенов и антител в зоне оптимального их соотношения образуются специфические комплексы — полосы преципитации, которые выявляют визуально или при окрашивании. Особенностью метода является то, что каждая пара антиген-антитело формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител.

Для постановки двойной иммунодиффузии наливают слой растопленного геля на стеклянную пластинку и после затвердевания вырезают лунки диаметром 1,5–3 мм. В расположенные по кругу лунки помещают исследуемые антигены, а в центральную лунку — иммунную сыворотку известной специфичности. Диффундируя навстречу друг другу, гомологичные сыворотки и антигены образуют преципитат.

При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини), иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой, вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр которых пропорционален концентрации антигена. Метод используют для определения классов иммуноглобулинов, а модификации метода можно применять для определения противомикробных антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов.

Читайте также:  Дегтярный шампунь от перхоти: помогает ли он и как сделать своими руками

Иммуноэлектрофорез основан на усилении миграции в геле антигенов и антител путем помещения пластины геля с реагентами в электрическое поле. При этом достигается разделение антигенов и антител на компоненты в соответствии с их подвижностью и зарядом.

Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез. В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против lgG-антител, которая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген-антитело обнаруживает методом авторадиографии.

3.Реакции с участием комплемента.

В качестве комплемента используют свежую сыворотку крови морской свинки, основанную на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам.

Реакция связывания комплемента (РСК) позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген-антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами барана (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов, гемолиза не наблюдается. Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана), вирусных и бактериальных инфекций.

Реакция радиального гемолиза эритроцитов может протекать в геле. Взвесь эритроцитов барана помещают в агарозный гель с комплементом; в застывшем на стекле слое делают лунки и вносят в них гемолитическую сыворотку. Вокруг лунок в результате радиальной диффузии антител образуется зона гемолиза, радиус которой прямо пропорционален титру сыворотки. Если сорбировать на эритроцитах какой-либо антиген, например гликопротеиновый гемагглютинин вируса гриппа, краснухи или клещевого энцефалита, то можно воспроизвести феномен гемолиза иммунными сыворотками к этим вирусам. Реакцию радиального гемолиза в геле применяют в диагностике вирусных инфекций. Она характеризуется простотой постановки, нечувствительностью к сывороточным ингибиторам, позволяет титровать сыворотки крови по диаметру зоны гемолиза, не прибегая к серийным разведениям.

Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (СЗ). Если к антигену (бактериям, вирусам и др.) добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген-антитело, покрытый СЗ-компонентом комплемента. Эту реакцию применяют при изучении ряда вирусных инфекций (клещевого энцефалита, денге), которые сопровождаются иммунопатологическими процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.

4.Реакция нейтрализации.

Основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры, патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.

5.Реакции с использованием химических и физических меток (ИФА).

Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченых флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченое флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген-антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства, отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате, в цитоплазме нервных клеток выявляются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции, основанный на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t 37° для образования иммунных комплексов, а затем, после отмывания несвязавшихся реагентов, выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.

Иммунофлюоресценцию широко используют не только в бактериологии, вирусологии, паразитологии, но и в иммунопатологии для обнаружения антител к тканевым антигенам человека.

Иммуноферментные или энзим-иммунологические методы основаны на использовании антител, конъюгированных с ферментами, главным образом пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Чтобы обнаружить соединение меченых антител с антигеном, добавляют субстрат, разлагаемый присоединенным к lgG ферментом, с окрашиванием в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфатаза) цвет. Используют также ферменты, разлагающие не только хромогенный, но и люмогенный субстрат. В этом случае при положительной реакции появляется свечение. Подобно иммунофлюоресценции, иммуноферментный метод применяют для обнаружения антигенов в клетках или титрования антител на антигенсодержащих клетках.

Наиболее популярной разновидностью иммуноферментного метода является иммуносорбция. На твердом носителе, которым могут быть целлюлоза, полиакриламид, декстран и различные пластмассы, сорбируют антиген. Чаще носителем служит поверхность лунок микропанелей. В лунки с сорбированным антигеном вносят исследуемую сыворотку крови, затем меченую ферментом антисыворотку и субстрат. Положительные результаты учитывают по изменению цвета жидкой среды. Для обнаружения антигенов, на носитель сорбируют антитела, затем вносят в лунки исследуемый материал и проявляют реакцию меченой ферментом антимикробной сывороткой. Повышению чувствительности иммунофлюоресцентного и иммуноферментного методов способствует введение в систему реакции авидина и биотина.

Радиоиммунологический метод основан на применении радиоизотопной метки антигенов или антител. Является наиболее чувствительным методом определения антигенов и антител, используется для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов. Первоначально он был разработан как специфический метод измерения уровня циркулирующих в крови гормонов. Тест-системой являлись меченый радионуклидом гормон (антиген) и антисыворотка к нему. Если к такой антисыворотке добавить материал, содержащий искомый гормон, то он свяжет часть антител, при последующем внесении меченого титрованного гормона с антителами свяжется уменьшенное по сравнению с контролем его количество. Результат оценивают по сопоставлению кривых связанной и несвязанной радиоактивной метки. Эта разновидность метода носит название конкурентной реакции. Существуют и другие модификации радиоиммунологического метода.

Иммуногистологические методы предназначены для определения антигенов на поверхности или внутри клетки, например для обнаружения маркеров лимфоцитов и иммунокомплексов при гломерулонефритах и других заболеваниях почек. В этой реакции для выявления антигенов пользуются или иммунофлюоресценцией, или иммуноферментными конъюгатами с пероксидазой. Количество специфических антигенов определяют по интенсивности окрашивания. Иногда используют автоматическую регистрацию с помощью спектрофотометра.

Иммуноблоттинг применяют для выявления антител к отдельным антигенам или «узнавания» антигенов по известным сывороткам. Метод состоит из 3 этапов:

  • разделения биологических макромолекул (например, вируса) на отдельные белки с помощью электрофореза в полиакриламидном геле;
  • переноса разделенных белков из геля на твердую подложку (блот), путем наложения пластины полиакриламидного геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозу (электроблоттинг);
  • выявления на подложке искомых белков с помощью прямой или непрямой иммуноферментной реакции.

Как диагностический метод, иммуноблоттинг используют при ВИЧ-инфекции. Диагностическую ценность имеет обнаружение антител к одному из белков внешней оболочки вируса.

Реакция агглютинации бактерий с использованием соответствующей антибактериальной сыворотки относится к наиболее простым серологическим реакциям. Взвесь бактерий добавляют к различным разведениям испытуемой сыворотки крови и через определенное время контакта при t 37° регистрируют, при каком наивысшем разведении сыворотки крови происходит агглютинация. Реакцию агглютинации бактерий используют для диагностики многих инфекционных болезней: бруцеллеза, туляремии, брюшного тифа и паратифов, бациллярной дизентерии, сыпного тифа.

Медицинская энциклопедия (сводная)
Иммунологические методы исследования

Иммунологические методы исследования

Иммунологические методы исследования – диагностические методы исследования, основанные на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко используются для лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней, определения групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений, а также в научно-исследовательской работе. Они включают серологические исследования, или серологические реакции, к которым относят обычно реакции прямого воздействия антигенов и антител сыворотки крови in vitro.

Серологические реакции различаются по способности выявлять отдельные классы антител. Реакция агглютинации, например, хорошо выявляет lgM-антитела, но менее чувствительна для определения lgG-антител. Реакции связывания комплемента и гемолиза, которые требуют участия комплемента, не выявляют антитела, не присоединяющие комплемент, например lgA-антитела и lgE-антитела. В реакции нейтрализации вирусов участвуют лишь антитела, направленные против антигенных детерминант поверхности вириона, связанных с патогенностью. Чувствительность И. м. и. превосходит все другие методы исследования антигенов и антител, в частности радиоиммунный и иммуноферментный анализы позволяют улавливать присутствие белка в количествах, измеряемых в нанограммах и даже в пикограммах. С помощью И. м. и. определяют группу и проверяют безопасность крови (гепатит В и ВИЧ-инфекция). При трансплантации тканей и органов И. м. и. позволяют определять совместимость тканей и тестировать методы подавления несовместимости. В судебной медицине используют реакцию Кастеллани для определения видовой специфичности белка и реакцию агглютинации для определения группы крови.

Иммунологические методы широко применяют в лабораторной диагностике инфекционных болезней. Этиологию заболевания устанавливают также на основании прироста антител к возбудителю в сыворотке крови реконвалесцента по сравнению с пробой, взятой в первые дни болезни. На основе И. м. и. изучают иммунитет населения по отношению к массовым инфекциям, например к гриппу, а также оценивают эффективность профилактических прививок.

Развитию иммунологических методов способствовало создание моноклональных антител, продуцируемых гибридомой, полученной в результате слияния иммунокомпетентной клетки В-лимфоцита и клетки миеломы мышей. Моноклональные антитела несут только одну химически однородную популяцию антител, комплементарную специфической детерминанте антигена, что позволяет осуществлять тонкую дифференциацию белков. Развитие И. м. и. идет как по линии совершенствования реагентов (чистоты антигенов и антител), так и по линии создания автоматизированных систем постановки реакций и их инструментального учета.

В зависимости от их механизма и учета результатов И. м. и. можно подразделить на реакции, основанные на феномене агглютинации; реакции, основанные на феномене преципитации; реакции с участием комплемента; реакция нейтрализации; реакции с использованием химических и физических методов.

Реакции, основанные на феномене агглютинации. Агглютинация представляет собой склеивание клеток или отдельных частичек – носителей антигена с помощью иммунной сыворотки к этому антигену.

Реакция агглютинации бактерий с использованием соответствующей антибактериальной сыворотки относится к наиболее простым серологическим реакциям. Взвесь бактерий добавляют к различным разведениям испытуемой сыворотки крови и через определенное время контакта при t°37° регистрируют, при каком наивысшем разведении сыворотки крови происходит агглютинация. Реакцию агглютинации бактерий используют для диагностики многих инфекционных болезней: бруцеллеза, туляремии, брюшного тифа и паратифов, бациллярной дизентерии, сыпного тифа.

Реакции агглютинации для определения группы крови и резус-фактора основаны на взаимодействии аллоантител (изоантител) и антигенов эритроцитов (см. Группы крови). Антитела против Резус-фактора являются неполными, они не способны к прямой реакции с резус-положительными эритроцитами, поэтому для их обнаружения используют реакцию Кумбса, основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток. К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, а вслед за этим антиглобулиновую сыворотку против lgG (непрямая реакция Кумбса). Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против lgG, и происходит агглютинация эритроцитов.

Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинации (РПГА, РНГА). В ней используют эритроциты или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса), на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела. Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами. называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов.

Читайте также:  Анастасия Акулич, автор на Сайт о развитии и воспитании детей

Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на феномене предотвращения (торможении) иммунной сыворотки гемагглютинации эритроцитов вирусами, используется для выявления и титрования противовирусных антител. Она служит основным методом серодиагностики гриппа, кори, краснухи, эпидемического паротита, клещевого энцефалита и других вирусных инфекций, возбудители которых обладают гемагглютинирующими свойствами. например, для серодиагностики клещевого энцефалита в лунки панели разливают двукратные разведения сыворотки больного на щелочном боратном буферном растворе. Затем добавляют определенное количество, обычно 8 АЕ (агглютинирующих единиц), антигена клещевого энцефалита и после 18 ч экспозиции при t°4° вносят взвесь гусиных эритроцитов, приготовленную на кислом фосфатно-буферном растворе. Если в сыворотке крови больного есть антитела к вирусу клещевого энцефалита, то антиген нейтрализуется и агглютинация эритроцитов не происходит.

Реакции, основанные на феномене преципитации. Преципитация происходит в результате взаимодействия антител с растворимыми антигенами. Простейшим примером реакции преципитации является образование в пробирке непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело. Широко применяют различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлетрофорез), которые носят одновременно качественный и количественный характер. В результате свободной диффузии в геле антигенов и антител в зоне оптимального их соотношения образуются специфические комплексы – полосы преципитации, которые выявляют визуально или при окрашивании. Особенностью метода является то, что каждая пара антиген – антитело формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител.

Для постановки двойной иммунодиффузии наливают слой растопленного геля на стеклянную пластинку и после затвердевания вырезают лунки диаметром 1,5-3 мм. В расположенные по кругу лунки помещают исследуемые антигены, а и центральную лунку – иммунную сыворотку известной специфичности. Диффундируя навстречу друг другу, гомологичные сыворотки и антигены образуют преципитат.

При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини) иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр которых пропорционален концентрации антигена. Метод используют для определения классов иммуноглобулинов, а модификации метода можно применять для определения противомикробных антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов.

Иммуноэлектрофорез основан на усилении миграции в геле антигенов и антител путем помещения пластины геля с реагентами в электрическое поле. При этом достигается разделение антигенов и антител на компоненты в соответствии с их подвижностью и зарядом.

Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против lgG-антител, которая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген – антитело обнаруживают методом авторадиографии.

Реакции с участием комплемента, в качестве которого используют свежую сыворотку крови морской свинки, основаны на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам.

Реакция связывания комплемента (РСК) позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген – антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами барана (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов гемолиза не наблюдается. Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана), вирусных и бактериальных инфекций.

Реакция радиального гемолиза эритроцитов может протекать в геле. Взвесь эритроцитов барана помещают в агарозный гель с комплементом; в застывшем на стекле слое делают лунки и вносят в них гемолитическую сыворотку. Вокруг лунок в результате радиальной диффузии антител образуется зона гемолиза, радиус которой прямо пропорционален титру сыворотки. Если сорбировать на эритроцитах какой-либо антиген, например гликопротеиновый гемагглютинин вируса гриппа, краснухи или клещевого энцефалита, то можно воспроизвести феномен гемолиза иммунными сыворотками к этим вирусам. Реакцию радиального гемолиза в геле применяют в диагностике вирусных инфекций. Она характеризуется простотой постановки, нечувствительностью к сывороточным ингибиторам, позволяет титровать сыворотки крови по диаметру зоны гемолиза, не прибегая к серийным разведениям.

Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (СЗ). Если к антигену (бактериям, вирусам и др.) добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген – антитело, покрытый СЗ-компонентом комплемента. Эту реакцию применяют при изучении ряда вирусных инфекций (клещевого энцефалита, денге), которые сопровождаются иммунопатологическими процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.

Реакция нейтрализации основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.

Реакции с использованием химических и физических меток. Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченных флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченное флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген – антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате в цитоплазме нервных клеток выявляются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции. основанный на выявлении комплекса антиген – антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t° 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.

Иммунофлюоресценцию широко используют не только в бактериологии, вирусологии, паразитологии, но и в иммунопатологии для обнаружения антител к тканевым антигенам человека.

Иммуноферментные, или энзим-иммунологические, методы основаны на использовании антител, конъюгированных с ферментами, главным образом пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Чтобы обнаружить соединение меченых антител с антигеном, добавляют субстрат, разлагаемый присоединенным к lgG ферментом, с окрашиванием в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфатаза) цвет. Используют также ферменты, разлагающие не только хромогенный, но и люмогенный субстрат. В этом случае при положительной реакции появляется свечение. Подобно иммунофлюоресценции иммуноферментный метод применяют для обнаружения антигенов в клетках или титрования антител на антигенсодержащих клетках.

Наиболее популярной разновидностью иммуноферментного метода является иммуносорбция. На твердом носителе, которым могут быть целлюлоза, полиакриламид, декстран и различные пластмассы, сорбируют антиген. Чаще носителем служит поверхность лунок микропанелей. В лунки с сорбированным антигеном вносят исследуемую сыворотку крови, затем меченную ферментом антисыворотку и субстрат. Положительные результаты учитывают по изменению цвета жидкой среды. Для обнаружения антигенов на носитель сорбируют антитела, затем вносят в лунки исследуемый материал и проявляют реакцию меченной ферментом антимикробной сывороткой. Повышению чувствительности иммунофлюоресцентного и иммуноферментного методов способствует введение в систему реакции авидина и биотина.

Радиоиммунологический метод основан на применении радиоизотопной метки антигенов или антител. Является наиболее чувствительным методом определения антигенов и антител, используется для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов. Первоначально он был разработан как специфический метод измерения уровня циркулирующих в крови гормонов. Тест-системой являлись меченный радионуклидом гормон (антиген) и антисыворотка к нему. Если к такой антисыворотке добавить материал, содержащий искомый гормон, то он свяжет часть антител, при последующем внесении меченого титрованного гормона с антителами свяжется уменьшенное по сравнению с контролем его количество. Результат оценивают по сопоставлению кривых связанной и несвязанной радиоактивной метки. Эта разновидность метода носит название конкурентной реакции. Существуют и другие модификации радиоиммунологического метода.

Иммуногистологические методы предназначены для определения антигенов на поверхности или внутри клетки, например для обнаружения маркеров лимфоцитов и иммунокомплексов при гломерулонефритах и других заболеваниях почек. В этой реакции для выявления антигенов пользуются или иммунофлюоресценцией, или иммуноферментными конъюгатами с пероксидазой. Количество специфических антигенов определяют по интенсивности окрашивания. Иногда используют автоматическую регистрацию с помощью спектрофотометра.

Иммуноблоттинг применяют для выявления антител к отдельным антигенам или «узнавания» антигенов по известным сывороткам. Метод состоит из 3 этапов: разделения биологических макромолекул (например, вируса) на отдельные белки с помощью электрофореза в полиакриламидном геле; переноса разделенных белков из геля на твердую подложку (блот) путем наложения пластины полиакриламидного геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозу (электроблоттанг); выявления на подложке искомых белков с помощью прямой или непрямой иммуноферментной реакции. Как диагностический метод иммуноблоттинг используют при ВИЧ-инфекции. Диагностическую ценность имеет обнаружение антител к одному из белков внешней оболочки вируса.

Библиогр.: Иммунологаческая диагностика вирусных инфекций, под ред. Т.В. Перадзе и П. Халонена, М., 1985; Иммунолюминесценция в медицине, под ред. Е.Н. Левиной, М., 1977; Иммуноферментный анализ, под ред. Т.Т. Нго и Г. Ленхоффа, пер. с англ., М., 1988; Практическая иммунология, под ред. П.Н. Бургасова и И.С. Безденежных, М., 1969.

Реакция связывания комплемента (РСК) позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген – антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами барана (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов гемолиза не наблюдается. Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана), вирусных и бактериальных инфекций.

Что показывает иммунологическое тестирование?

При взятии крови на иммунограмму специалисты чаще всего обращают внимание на четыре показателя, что позволяет определить состояние иммунной системы:

  1. Клеточный иммунитет — устанавливается количество лейкоцитов, пропорции белых кровяных клеток в лейкограмме, оценивается индекс пролиферативной активности;
  2. Фагоцитоз;
  3. Определение уровня антител в крови;
  4. Гуморальный иммунный ответ — смотрят выработку иммуноглобулинов к чужеродному антигену, обращают внимание на уровень антител, содержание в крови B-лейкоцитов, определяют циркулирующие иммунокомплексы в крови.

Обратите внимание! При правильно выполненной иммунограмме видна картина активности молекул интерферона. Компоненты комплемента идентифицируют антигены, а молекулы интерферона противоборствуют вирусам и инородным микроорганизмам.

  1. Клеточный иммунитет — устанавливается количество лейкоцитов, пропорции белых кровяных клеток в лейкограмме, оценивается индекс пролиферативной активности;
  2. Фагоцитоз;
  3. Определение уровня антител в крови;
  4. Гуморальный иммунный ответ — смотрят выработку иммуноглобулинов к чужеродному антигену, обращают внимание на уровень антител, содержание в крови B-лейкоцитов, определяют циркулирующие иммунокомплексы в крови.
Добавить комментарий